层析法:柱层析法的原理？

1.柱层析法的原理？

薄层层析又叫薄层色谱，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固—液吸附色谱，一方面适用于少量样品（几到几微克，把吸附层加厚加大，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示。又称薄层层析，属于固－液吸附色谱，是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于小量样品（几到几十微克。另一方面若在制作薄层板时；把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品，因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成，薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂。

2.纸层析法的应用

有时用纸层析法分离试样组分，在做叶绿体色素分离时用到,浸出绿色液体，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体，四种色素在层析液中的溶解度不同，在滤纸上留下4条色素带。由此观查出各种色素的相对含量和种类。纸层析法一般用于叶绿体中色素的分离，叶绿体中色素主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b，它们在层析液中的溶解度不同，溶解度大的随层析液在滤纸上扩散地快，含量较多者色素带也较宽。最后在滤纸上留下4条色素带，所以利用纸层析法能清楚地将叶绿体中的色素分离。防止丙酮挥发) 量筒 烧杯 漏斗软木塞 滤纸 丙酮（可用无水乙醇替代） 四氯化碳 无水硫酸钠 碳酸钙 石英砂 1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙(防止叶绿素被破坏）和石英砂（帮助研磨），研磨成匀浆，即为色素提取液。并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。3．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠（即层析液）。然后将滤纸条固定于软木塞上，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），直立于阴暗处进行层析。观察分离后色素带的分布。再下面蓝绿色为叶绿素a，植物叶绿体中色素的提取与分离用具：剪刀一把、干燥的定性滤纸、50ml的烧杯及100ml的烧杯各3个、白纸3张、试管架一个、研钵一个、玻璃漏斗一个、尼龙布或纱布、毛细血管一只、药勺一个、10ml量筒一只，试管3支、纸板一块、棉塞3个、培养皿3个、刻度尺、注射器一只、盖玻片试剂：丙酮、无水乙醇、层吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化硅、碳酸钙、碳酸钠材料：叶绿素等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂而不用水。加入少许二氧化硅是为了磨碎细胞壁、质膜、叶绿体被膜和光合片成，使色素溶解于丙酮中。3、 破碎的细胞中含有草酸等有机酸，叶绿素分子中含有的Mg元素处于不稳定化合态，镁离子与有机酸结合将导致色素分子破坏。加入少许碳酸钙使得钙离子与有机酸结合，减少镁离子的转移，防止研磨时叶绿体色素的破坏。所以在研磨时加入适量的碳酸钙，4、 在过滤时选用脱脂棉或纱布，（1）色素分子比较大，不容易透过滤纸；（2）滤纸有较强的吸附性而使色素吸附在滤纸上，从而降低色素浓度，脱脂棉可以减少实验过程中色素的流失，画滤纸细线前滤纸必须经过干燥处理，是为了阻止水分子堵塞滤纸中的毛细管而影响层析液的扩散。会使滤纸纤维变形同时破坏啦毛细管，而影响层析液的扩散。6、 由于液面的不同位置表面张力不同，层析液沿滤纸边缘扩散过快。

3.层析法有哪些

◆按层析的机理划分：吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。吸附层析：利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的差异，利用不同组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，离子交换层析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。凝胶层析：利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。◆按流动相与固定相的不同划分：气相层析、液相层析。这两大类层析是以流动相不同来划分的。气固层析、气液层析、液固层析和液液层析等。柱层析、纸层析、薄层层析、高效液相层析等。柱层析：使样品沿一个方向移动而达到分离。用滤纸做液体的载体，将适当粒度的吸附剂铺成薄层，以纸层析类似的方法进行物质的分离和鉴定。如亲和层析应属于一种特殊的吸附层析，柱层析可做各种层析。◆吸附层析吸附剂的吸附力强弱，被吸附物的化学结构如与吸附剂有相似的电子特性，常用吸附剂的吸附力的强弱顺序为：活性炭、氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙、磷酸钙、石膏、纤维素、淀粉和糖等。吸附剂在使用前须先用加热脱水等方法活化。大多数吸附剂遇水即钝化，因此吸附层析大多用于能溶于有机溶剂的有机化合物的分离，洗脱溶剂的解析能力的强弱顺序是：常用两种或数种不同强度的溶剂按一定比例混合，得到合适洗脱能力的溶剂系统，◆分配层析在支持物上形成部分互溶的两相系统。常用支持物是硅胶、纤维素和淀粉等，被分离物质在两相中都能溶解，展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。◆离子交换层析支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子，如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。如磺酸基（—SO3H）、羧甲基（—CH2COOH）和磷酸基等为阳离子交换剂。如DEAE—（二乙基胺乙基）和QAE—（四级胺乙基）等为阴离子交换剂。离子交换层析只适用于能在水中解离的化合物，对于蛋白质、核酸、氨基酸及核苷酸的分离分析有极好的分辨力。离子交换基团在水溶液中解离后，能吸引水中被分离物的离子，各种物质在离子交换剂上的离子浓度与周围溶液的离子浓度保持平衡状态，各种离子有不同的交换常数，增加溶液的离子强度，离子被取代而解吸下来。◆凝胶过滤层析支持物是人工合成的交联高聚物，在水中膨胀后成为凝胶。凝胶内为内水层，凝胶周围的水为外水层。控制交联度以形成不同孔径的网状结构。交联度大的孔径小。凝胶只允许被分离物质中小于孔径的分子进入，大于孔径的分子被排斥在外水层，而进入孔径的分子也按分子量大小大致分离成不同的区带。可把一个混合物按分子量的差异分成不同的组分。开创了近代层析的发展和应用的新局面。纸层析已逐渐为其他分辨力更高、速度更快和更微量化的新方法，如离子交换层析、薄层层析、高效液相层析等所代替。◆薄层层析在玻璃片、金属箔或塑料片上铺上一层约1～2毫米的支持物，如纤维素、硅胶、离子交换剂、氧化铝或聚酰胺等，根据需要做不同类型的层析。聚酰胺薄膜是一种特异的薄层，将尼龙溶解于浓甲酸中，在涤纶片基上形成一层多孔的薄膜，其分辨力超过了用尼龙粉铺成的薄层。薄层层析较纸层析优越在于分辨高，例如用纸层析做氨基酸分析，而且对层析条件要求严格，不易得到满意的分离效果。如用薄层层析做，分离效果更好。薄层层析一般用于定性分析。也能用于定量分析和制备样品。◆高效液相层析（又名高压液相色谱）70年代新发展的层析法。用直径约3～10微米的超细支持物装填均匀的不锈钢柱。常用的支持物是在玻璃小珠上涂一层1～2微米的二氧化硅，经硫酰氯反应生成Si—Cl，进一步连接疏水的烷基，或阳离子交换基团—Si（CH2）n—C6H4SO3H，或阴离子交换基团—Si（CH2）nNH2。用不同类型支持物的HPLC，可做吸附层析、离子交换层析和凝胶过滤层析。可以纯化上克的样品。其分析速度、精确度可与气相层析媲美。HPLC适于分析分离不挥发和极性物质。而气相层析只适用于挥发性物质，都是目前最为理想的层析法。HPLC配有程序控制洗脱溶剂的梯度混合仪，在生物化学、化学、医药学和环境科学的研究中发挥了重要作用。◆反相层析在吸附层析中，高极性物质在层析柱上吸附较牢，洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类，洗脱液用极性强的溶剂，如甲醇和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附，得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反，故称为反相层析。目前用HPLC做反相层析常用的ODS柱，即在支持物的表面上连接了C18H37Si—基团。◆同系层析在核酸分析中，将样品经核酸酶部分裂解成不同长度的核苷酸片段，在DEAE纤维素薄层上分离，用含有未标记的相同的核苷酸片段作展层溶剂，未标记的核苷酸把标记过的核苷酸推进，使按分子量大小不同把标记核苷酸片段，于是把这种层析法称为同系层析。同系层析和电泳相结合曾用于寡核苷酸的顺序分析。要了解纸层法还得从层析法开始.层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），是一种基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同。

4.什么叫薄层层析法？原理是什么啊？

薄层层析又叫薄层色谱，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固—液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。 薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。一方面适用于小量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。因此又可用来精制样品。故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。 薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，带干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。

5.纸层析法原理

纸层析法又称纸色谱法，是用纸作为载体的一种色谱法。

6.层析法按原理分类有哪几种各自分离依据是什么

1、吸附层析：主要利用吸附剂对被吸附成分的吸附能力差异进行分离2、分配层析：主要利用被分离成分在两相不相混溶的溶剂中分配系数的差异进行分离3、离子交换层析：主要利用被分离成分对离子交换剂的亲和能力的不同进行分离。

7.什么叫作纸层析法？

这个在做叶绿体色素分离时用到就是将叶片碾碎，将液体与层析液（石油醚）混合，将滤纸一段进入混合液体。