硅胶柱:硅胶柱层析的操作技术

1.硅胶柱层析的操作技术

硅胶柱层析的原理利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。硅胶柱层析的操作方法及注意事项：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。有干法装柱和湿法装柱两种方法（1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；说明溶剂中含水量太大，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，不能用氯仿体系过柱。上样将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，加入层析柱中硅胶面上。如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可。上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。洗脱洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。上端不断添加洗脱剂（可用分液漏斗控制添加速度与下端流出速度相近）。

2.酸性硅胶柱如何处理可以成为中性或碱性

遇到酸可能会变质，但是没时间去买中性氧化铝或中性硅胶了，所以只能拿实验室的酸性硅胶做。以前听说过在硅胶中加入几滴三乙胺或氨水可以起到中和作用。如果我要这样处理硅胶的话。

3.硅胶柱层析的硅胶柱层析惯用方法

也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。将柱底用棉花塞紧，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，将匀浆一次倾入蓄液球内。会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。无论走常压柱或加压柱，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。干法湿法都可以。再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。而不会冲坏硅胶表面。6.过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。0.5ml收一馏分；50g硅胶（200-300目）。

4.硅胶柱干了怎么办

根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附。

5.硅胶柱的原理？

硅胶层析法的分离原理是：根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离， 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。也就是说，利用吸附的特性起分子筛的作用。

6.葡聚糖凝胶柱层析和硅胶柱层析的区别

这个葡聚糖凝胶柱层东西比较贵可以重复用，再过葡聚糖凝胶Sephadex LH_20柱，硅胶柱层析原理：硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附。

7.氰基硅烷键合硅胶柱（色谱柱）

氰基硅烷键合硅胶柱，(1) 在正相和反相中都能有应用(2) 稳定的高覆盖率的单键合相，充分封端球型(3) 较低的疏水性，由于氰基的存在，具有独特的选择性(4) 与裸硅胶不同的选择特性；与裸硅胶柱相比。