pfu酶:用的pfu酶,按照说明书的步骤跑的PCR 结果是这样的,请问是什么原因?

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1.用的pfu酶,按照说明书的步骤跑的PCR 结果是这样的,请问是什么原因?

首先一个问题是你的胶做得不好,这种情况其实很简单就可以解决,配方正确的基础上,冷却的完全,很多人的marker都这个样子,不要急于一时。再有个你的目的条带如果是250左右那就问题不大,这次结果拖尾严重最主要是胶的问题。但是又出现这个大小的条带。

2.关于pfu酶扩增PCR产物

酶切位点是你切过之后才是粘性末端 Pfu扩增出来是平末端 所以没法连普通的T载体 不过也有平末端链接的T载体

3.PfuDNA聚合酶的Pfu聚合酶的校正作用

如果阳性能扩出才说明没有问题。以前能扩出来不代表现在酶没有问题。

4.做PCR时,用Taq酶做不出来,用Pfu酶就能做出来

你分别做阴阳性对照了吗?如果阳性能扩出才说明没有问题。以前能扩出来不代表现在酶没有问题。一般都是Taq能扩出来,pfu反而扩不出,因为后者高保真效率低一些

5.PfuDNA聚合酶的介绍

PfuDNA聚合酶(Pfu DNA polymerase),又称Pfu聚合酶,一类能在活体内进行DNA复制的酶。该酶含有2个蛋白亚基(P45和P50),为多聚体,该酶同时具有5&-3&聚合酶活性和3&-5&外切核酸酶活性,因此在聚合反应中可纠正错误掺入的碱基,在聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)中,使用Pfu聚合酶可以快速,高保真的扩增DNA片段。

6.primestar03 hs dna polymerase是taq酶还是pfu酶

常见的高保真酶有Pfu,但是我用过最好用的高保真酶是Phusion. 因为一般的高保真酶因为有外切酶的活性,但是扩增效率会降低。

7.5U/ul 250 U/支 pfu酶,需要加入0.25ul,请问,需要,多少U的pfu酶?PCR中,这个酶需要多少量?

ul,一共250 U/加入0.25ul就相当于加入0.25x5U=1.25U。第二个问题我完全不懂意思。

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