丙二醛含量测定:丙二醛提取液要马上测定吗

1.丙二醛提取液要马上测定吗

为什么加热时间又不能过长

2.植物组织中有哪些物质影响丙二醛的测定

植物组织中的丙二醛(MDA) 在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸(TBA) 产生显色反应,反应产物为粉红色的3,4一二酮(Trimet—nine).该物质在539nm波长下有吸收峰.由于硫代巴比妥酸也可与其它物质反应,为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响,在丙二醛含量测定时,同时测定600nm下的吸光度,利用539nm与600nm下的吸光度的差值计算丙二醛的含量.植物组织丙二醛含量测定植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化,如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等.这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化.近来大量研究表明,细胞内活性氧代谢的平衡被破坏而有利于活性氧的积累.活性氧积累的危害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用,造成细胞膜系统的损伤,严重时会导致植物细胞死亡.活性氧包括含氧自由基.自由基是具有未配对价电子的原子或原子团.生物体内产生的活性氧主要有超氧自由基(O-2)、羟自由基(OH·)、过氧自由基(ROO·)、烷氧自由基(RO·)、过氧化氢（H2O2）、单线态氧（O21）等.植物对活性氧产生有酶促和非酶促两类防御系统,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶POD和抗坏血酸过氧化物酶(ASA—POD)等是酶促防御系统的重要保护酶,抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂.丙二醛(MDA)是细胞膜脂过氧化作用的产物之一,它的产生还能加剧膜的损伤.因此,丙二醛产生数量的多少能够代表膜脂过氧化的程度,也可间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱.所以在植物衰老生理和抗性生理研究中,丙二醛含量是一个常用指标.[材料、仪器、药品]1．材料：植物抗逆性鉴定实验中的四种菠菜样品,即绿色和黄色叶片的高温处理和室温对照.2．仪器：（3）水浴锅：(7) 5ml刻度离心管；L pH7.8磷酸钠缓冲液；(3) 5％三氯乙酸溶液：先用少量蒸馏水溶解,然后定容到100ml；(4) 0.5％硫代巴比妥酸溶液：用5％三氯乙酸溶解,定容至100ml,即为0.5％硫代巴比妥酸的5％三氯乙酸溶液.[方法]1．丙二醛的提取：取0.5g样品,加入2ml预冷的0.05mol/L pH7.8的磷酸缓冲液,在经过冰浴的研钵内研磨成匀浆,转移到5ml刻度离心试管,将研钵用缓冲液洗净,清洗也移入离心管中,最后用缓冲液定容至5ml.在4500转/min离心10min.上清液即为丙二醛提取液.2．丙二醛含量测定：吸取2 ml的提取液于刻度试管中,以蒸馏水为空白调透光率100%,测定吸光度.3．结果计算：(A532—A600) ×V1×V1.55×10-1×W×V2丙二醛含量（nmol/V1为反应液总量(5m1)；V为提取液总量(5ml)；V2为反应液中的提取液数量(2ml)；W为植物样品重量(0.5g)；1.55×10-1为丙二醛的微摩尔吸光系数（在1升溶液中含有1µmol丙二醛时的吸光度）.4．注意事项：(1) 0.0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适,若高于此浓度,

3.丙二醛含量的测定中为什么要加TCA

TCA与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，使之聚集沉淀.③随着蛋白质分子量的增大，TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时。

4.植物组织中丙二醛的含量说明什么

再做一次吧

5.丙二醛含量测定是600纳米的吸光值为负值，那该怎么计算呢？

实验出错，再做一次吧

6.巴比妥酸含量测定？

采用硫代巴比妥法检测血浆中MDA的浓度，（1）把试管编号，分别编为标准管、标准空白管、测定管和测定空白管；试管编号后按下表加入试剂：表2.1 血浆中丙二醛含量测定的步骤试剂标准管标准空白管测定管测定空白管10 ng/ml标准品（ml）0.1———无水乙醇（ml）—0.1——测试样品（ml）——0.10.1试剂一（ml）0.10.10.10.1（2）漩涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，（3）取出后流水冷却，吸取上清比色时用移液器吸取上清加入比色皿中，以免沉淀进入比色皿，影响吸光度；蒸馏水调零，测各管吸光度值；（6）计算血浆中MDA的含量：

7.菊花叶片丙二醛含量为负值

可能是仪器不稳定，会在短波或者长波处出现负值。